注意事項:
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,若有上述現象發生請及時和我們聯系。
2. 先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置數小時(4h左右),穩定細胞狀態,切忌在溫箱內靜置過夜。
3. 靜置后鏡檢,拍照,記錄細胞狀態。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。
4. 貼壁細胞:若細胞密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,收集細胞瓶內的培養基,留8ml繼續培養至80%左右再傳代,瓶蓋可稍微擰松。
5. 細胞瓶內的培養基含血清和雙抗,可收集后4℃保存備用,可補加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內的培養基,一半用客戶自備的培養基,使細胞逐漸適應培養條件,以免因不適應而造成生長狀態不佳。
6. 細胞胰酶消化液建議使用PBS配制,
7. 因為細胞培養過程外因太多,所以我們的售后保障期為一周,超過一周的細胞我們會酌情處理,但不提供免費更換服務。 細胞運輸和保存:可選擇干冰運輸及發送復蘇存方式:(1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇;收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
服務流程:
(1)客戶提供:目的細胞具體信息;
(2)操作過程:細胞復蘇培養,細胞發貨;
產品名稱 |
正常卵巢上皮細胞 IOSE-80 |
規格 |
詳見說明書 |
貨號 |
BH-0110410 |
英文簡稱:IOSE-80細胞
產品名稱:正常卵巢上皮細胞 IOSE-80
規格:T25
形態特性:上皮樣
生長特性:貼壁生長
特征特性:
培養條件:1640+10%FBS
傳代方法:1:3傳代;2~3天1次。
培養操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片完全浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。
實驗要點及說明 :
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程:
1、您收到母細胞后,請按照以下方法進行操作:
取出25cm2培養瓶,75%酒精擦拭培養瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細胞培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態,然后換用新鮮完全培養液繼續培養或進行傳代。
2、細胞傳代:
1)細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時,棄25cm2培養瓶中的培養液,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3)棄上清,沉淀細胞用12ml完全培養基重懸,然后按1:2比例進行分瓶傳代,*后放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養;
4)待細胞完全貼壁后,觀察培養結果,之后進行換液培養或傳代。
3、細胞凍存:
1)細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時,棄25cm2培養瓶中的培養液,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3)用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細胞,并放置于凍存管中;
4)先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
4、細胞復蘇:
1)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2)將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養基的15ml離心管中, 1000rpm離心5min;
3)棄上清,沉淀用5ml完全培養基重懸,接種25cm2培養瓶,于37℃,5%CO2細胞培養箱中培養;
4)換用新鮮完全培養基繼續培養。
蘇丹黑 BSudan Black B (certified by the Biolog...4197-25-55G
臺盼藍Trypan Blue (Dye content, ≥60%)72-57-15G
甲苯胺藍 OToluidine Blue O (certified by the Bio...92-31-95G
羅丹明 123Rhodamine 123 (for fluorescence, ≥90....62669-70-95MG
酸性品紅Acid Fuchsin (Dye content, Approx.70%)3244-88-025G
異硫氰酸熒光素 (常...Fluorescein isothiocyanate isomer I (F...3326-32-750MG
異硫氰酸熒光素 (超...Fluorescein isothiocyanate isomer I (F...3326-32-750MG
曙紅 Y (二鈉鹽)Eosin Y disodium salt (Dye content, ≥...17372-87-110G
溴酚藍 (常規)Bromophenol Blue (≥90%)115-39-95G
溴酚藍 (超純級)Bromophenol Blue (Dye content 95%, ACS)115-39-95G
吖啶橙Acridine Orange base, 75%494-38-21G
3,3',5,5'-四甲基聯...3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine (≥99%,...54827-17-7100MG
正常卵巢上皮細胞 IOSE-80Trichomonas foetus胎兒滴蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周
Semen allii tuberosi韭菜子探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周
Hepatitis B Virus Pregenomic RNA(HBV pgRNA)乙型肝炎病毒前基因組RNA 探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周
Bovine Reovirus牛呼腸孤病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周
Helicobacter cinaedi戀螺桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周
Chinese Mitten Crabs Trembling Disease Virus河蟹顫抖病病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周
Barley Mild Mosaic Virus(BaMMV)大麥輕度花葉病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周
Radix stemonae百部探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周
Canine Adenovirus Type 1(CAV-1)犬腺體病毒1型(犬傳染性肝炎病毒)LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用) 50次 低溫 負20度 一年 2-3周
Penicillium versicolor雜色青霉LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周
羊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周
Folium nelumbinis荷葉PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周
Porcine Endogenous Retrovirus(PERV) Provirus 豬內源性逆轉錄病毒前病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周